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实验室工作须知及简单操作方法

来源:本网采编 作者: 时间:2008-01-26

  (1)绒毛尿囊膜接种法: 

  ①接种步骤:选用孵化10~12天的鸡胚,划出气室及绒毛尿囊膜的发育面,在绒毛尿囊膜处(靠近胚胎而无大血管处)蛋壳上,用碘酊及酒精消毒后,锉一个三角形或方形裂痕,除去蛋壳造成“蛋窗”,注意勿伤及蛋壳膜。另在气室中心钻小孔,将蛋横卧于蛋盘(座)上,在壳膜窗上滴无菌盐水1滴,以针尖将蛋壳膜划破一小孔,不可伤及下面的绒毛尿囊膜,然后用胶皮乳头置于气室端之小孔处往外吸气,使盐水渗入壳膜与绒毛尿囊膜的裂隙内,此时绒毛尿囊膜即下陷,与壳膜完全分离,而形成人工气室。以注射器注入0.05毫升病毒液于绒毛尿囊膜表面(应于造蛋窗后的1~2小时接种,否则干燥后不能用),然后用玻璃纸盖于蛋窗上,周围涂以溶化的石蜡密封。同时封闭气室端小孔。横卧于蛋盘上,放在35~37℃温箱内,不能翻动。每日自蛋窗检查1次,如病毒发育良好,则鸡胚通常在48~96小时内死亡。 

  ②收获方法:将待收获的鸡蛋蛋窗用碘酊消毒,用灭菌镊子撕掉玻璃纸,扩大蛋窗,除去蛋壳膜,轻轻夹起绒毛尿囊膜,用小剪子沿人工气室周围将接种的绒毛尿囊膜全部剪下,放置在双碟或玻璃板上,观察病变。将病变显著的部分,放入灭菌小瓶内保存。 

  (2)尿囊接种法 

  ①接种步骤:选用孵化10~11天的鸡胚经照视后,划出气室和胎位,在鸡胚旁无大血管处用铅笔划一记号,用碘酊和酒精消毒后,以灭菌钢锥在接种处钻一小孔,只破蛋壳而不破壳膜。针头没小孔避开鸡胚斜向刺入0.5~1.0厘米处,注入0.1~0.2毫升病毒悬液。用石蜡封口后,置温箱内孵化。每日翻蛋两次,检查一次。 

  ②直立收获方法:收获时间须根据所感染病毒种类而定。收获前置冰箱中冰冻一夜,以免解剖时出血。收获时将鸡蛋放在蛋架上,用碘酊和酒精将气室端消毒,用灭菌镊子除去气室部蛋壳及蛋壳膜,在绒毛尿囊膜无大血管处穿破,用吸管吸取尿囊液。每一鸡胚约可得尿囊液5~6毫升,贮入小瓶中冰冻保存。

 

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