用自制药敏试纸进行肉鸡大肠杆菌病的药敏试验

　　吴树康1  杨皓2(1．山东省龙口市畜牧兽医工作站；2．中南民族大学生命科学院)

　　一　试验材料和方法

　　1　药敏试纸的制备

　　药敏纸片的制备：取杭州富阳特种纸厂生产的直径18cm的定量滤纸，用打孔器打成直径为6mm的圆形纸片，取100片圆形纸片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎，120℃干燥灭菌2小时备用。

　　药液的制备：按兽药说明书上标明的治疗量比例配制药液。如规格为100g的抗菌物，包装说明兑水200千克，即用天平称药物1g加50mL的灭菌注射水置于灭菌器皿内，充分溶解后吸出1mL置于另一个灭菌容器中，再加入39mL的灭菌注射水。

　　药敏纸片的制作：将含有100片纸片的青霉素瓶内加入配置好的药液0.5mL，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密封，切勿受潮，置阴暗干燥处存放备用。

　　2　细菌的分离培养与鉴定

　　细菌的分离培养：采用常规法将细菌病料接种于麦康凯培养基上，37℃培养24小时。挑取单个菌落于普通琼脂平板上进行纯培养，37℃培养24小时。挑取单个菌落进行革兰氏染色、镜检，镜下可见大量散在的红色、中等大小、两端钝圆的无芽孢直杆菌，初步确定为大肠杆菌。

　　生化试验：取待检菌培养物分别接种在蛋白胨水、缓冲蛋白胨水、枸橼酸盐、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素琼脂、三糖铁琼脂、半固体琼脂培养基上，置37℃恒温箱中，培养24小时。结果显示：能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇，产酸。尿素酶试验阴性，不产生H2S，有鞭毛，能运动。符合大肠杆菌的生化特性，证实确为大肠杆菌。

　　3　药敏试验

将麦康凯培养基上认定的大肠杆菌菌落，无菌环境下用接种环挑出，均匀涂布在营养琼脂培养基上，同时等距离放置以下药敏纸片：诺氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、氨苄西林、多粘菌素、头孢曲松、氟苯尼考，置恒温箱中培养24小时，按以下标准判定药物敏感度。

　　二　试验结果

　　药敏试验结果为：本次分离的大肠杆菌对头孢噻肟、氟苯尼考、头孢曲松、多粘菌素高敏以上，对环丙沙星中度敏感，对诺氟沙星和氨苄西林不敏感。

　　三　临诊推广应用

　　根据试验结果，我们对前来就诊的发生肉鸡大肠杆菌病的养殖户进行指导治疗，都受到很好效果。如我市七甲镇姜良宏肉鸡场先后购进两批雏鸡各5000只，第一批鸡20日龄时出现发病，经实验室诊断为大肠杆菌病，按常规用庆大霉素饮水治疗一周后，虽然停止了死亡，但仍有部分肉鸡排稀便，先后死亡500余只，花医药费1000余元。第二批肉鸡于22日龄发病，经实验室诊断仍为大肠杆菌病，通过药敏试验，选用了抑菌效果高敏的氟苯尼考全群拌料治疗，仅3天就将病情基本控制，再无新病例出现，之后继续用药两天，鸡群完全康复。仅死亡雏鸡85只，医药费仅用650元。

　　四　小结与讨论

　　用自制药敏试纸进行药敏试验，能够准确找出病原体的高敏药物，有的放矢地消灭病原体，从而克服了试探性或盲目性用药，减少了损失，提高了禽病的防治效果。

　　自制药敏试纸经济，一方面可以有效地指导养殖户防治禽病，另一方面对本单位的药品经营也有一定的指导作用。

　　影响药敏试验结果的因素有很多，如采集病料的部位、药敏纸片或药物浓度的变化、细菌培养条件是否达标等等，所以试验过程一定要一丝不苟，认真对待，才会有准确的结果。