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胶体金检测技术的应用

  胶体金免疫层析分析(GICA)是应用胶体金标记技术,以胶体金作为示踪物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。层析过程中,金标记物与事先固相化于层析材料上的抗原或抗体发生特异性的免疫反应而被截留,进一步富集,形成肉眼可见的紫红色条带,从而得到直观的实验结果,达到快速检测的目的。
GICA在畜禽疾病诊断应用方面已有较多优秀的产品,如猪瘟、蓝耳病、禽流感、犬细小病  毒病等快速诊断试剂卡,在鸡疫病诊断和检测方面,主要还是针对禽疫病病原的检测,并未涉及抗体的检测。
  本公司在国内率先开展了针对胶体金在鸡病诊断和抗体检测技术应用的研究,并取得了丰硕的成果。先后研制成功了禽流感病毒抗原快速检测卡(通用型)、禽流感H9亚型病毒快速检测卡、抗禽流感疫苗与病毒感染的抗体快速鉴别诊断卡、禽流感病毒抗体快速检测卡、鸡传染性法氏囊病抗体快速检测卡以及鸡传染性支气管炎抗体快速检测卡、鸡毒霉形体抗体快速检测卡等一系列抗原、抗体胶体金检测产品。
  本类产品的操作方法极其简单,采集血清样品或相关样品,用生理盐水或其它样本稀释液稀释一定倍数;检测卡由铝箔袋内取出后,平放于桌面上,取2-3滴制备好的样品液(约100μL)逐滴滴入试剂卡的加样孔中,10min内判定结果。在检测抗原时,若样本为血清,有时其浓度过高会造成层析流动缓慢,可加1~2滴稀释液,适当推动样品顺畅地流动,能得到较好的反应结果;如果是检测抗体,则需要按要求稀释一定倍数。
  粪便取样后要充分与稀释液混匀,静置1分钟,然后取上清液。注意取样溶液中不应含粪渣及悬浮杂质,它会将样品孔内的膜孔堵塞,溶液很难渗进试剂卡,反应不能顺利进行,甚至出现白板现象。参照以下操作示意图:

胶体金检测技术结果判定方法:
1、阳性结果:在试剂卡上出现两条红色条带(检测线“T”和对照线“C”)见下图:

“T”线颜色深浅与被检样中的抗体效价呈正相关,颜色越深说明被检测样品的抗体效价越高;与“C”线比较,“T”线颜色浓厚,与“C”线颜色一致或接近时判为++++,见图A,颜色深度介于+与++++之间时酌情判++或+++,见图B、C。达到+及以上的颜色深度时,判为该份被检样品的抗体为阳性,见图D。
阴性:当试剂卡出现紫红色质控线(C线),没有出现检测线(“T”线)时,结果判为阴性,记为“—”;

无效:质控线(“C”线)无条带出现则判为检测试剂卡失效。(如图A、B)

地址:武汉市洪山区狮子山街1号华中农业大学国家兽药残留基准实验室108室
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