H9亚型禽流感在雏鸡和青年鸡群的流行病学调查和防制
王群义 栾栋祖、刘东、李彬、刘平、刘红祥、王宗升、刘晓东、马东、国平
2010年2月份至今，在山东、广东、辽宁、浙江等地的一些白羽肉鸡、三黄鸡和15-70日龄的商品蛋鸡流行一种以咳嗽、呼噜、怪叫和张口喘为主要特征的急性传染病，为了解此病的流行特征，开展此项工作，现将调查情况报告如下。
1 流行情况调查
1.1 调查时间 2010年2月至2011年2月底。
1.2 调查方法
1.2.1 就诊病例 对前往青岛易邦生物工程有限公司门诊就诊的病例，详细了解记录鸡群发病过程及发病前后鸡场免疫、用药情况，现场剖检观察病理变化，并采集有典型病变的组织用PCR方法或接种鸡胚的方法检测是否感染了禽流感（H9N2）。
1.2.2 发病现场调查 青岛易邦生物工程有限公司的技术服务人员前往发病鸡场实地调查发病情况，调查内容同1.2.1。
1.2.3全国部分养殖公司发送青岛易邦公司的病料。调查内容同1.2.1
1.3调查范围 发病鸡群主要来自山东、河南、河北、辽宁、广东、广西、江苏、湖南、天津、浙江等省市的养鸡密集地区。
1.4 调查病例分布情况 我们共调查有类似症状的病例352批（场），各省市病例数量及发病鸡群初发日龄分布情况见表1.
表1 被调查病例分布情况
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调查地点
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白羽肉鸡
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蛋鸡
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三黄鸡或麻黄
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病例数
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日龄
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病例数
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日龄
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病例数
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日龄
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山东
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167
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15-30
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59
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35-80
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5
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35
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广东
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--
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--
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23
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20-60
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广西
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--
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--
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--
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--
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2
|
35
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浙江
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--
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--
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2
|
33
|
2
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45
|
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江苏
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--
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--
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8
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35-60
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3
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43
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湖南
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---
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--
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3
|
70
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--
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--
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湖北
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--
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--
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4
|
65
|
--
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--
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河南
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--
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--
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6
|
40-80
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--
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--
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河北
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8
|
20-30
|
11
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20-50
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天津
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8
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20-30
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--
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--
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--
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--
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合计
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2 主要流行特点
2.1 季节性明显：2010年11月，辽宁、河北、山东等地的鸡群发病率逐渐增加，12月份该病在山东的发病率达到高峰；1月份广东、浙江、广西、江西等地的发病率呈增高趋势。
2.2 在已调查的鸡场中，90%的鸡群都免疫过禽流感（H9）油苗，免疫不同公司的鸡新城疫-禽流感（H9）二联油苗的鸡群，发病率和死亡率差别较大，但都不能完全阻止该病的发生。
2.3 传播速度、发病程度和死淘率与饲养管理密切相关；管理好的鸡场，发病率较低，发病日龄推迟，死淘率较低。有些管理不好的鸡场在25日龄不得不提前淘汰。
2.4 抗生素治疗无效。
3 临床症状
3.1病鸡主要表现以咳嗽、呼噜、喷嚏、张口呼吸，怪叫为主的呼吸道症状；病鸡精神不振，头插翅膀下，拉黄白色粪便，采食量下降幅度可达10-20%。一般病程为10-15天。死亡率较高达10-20%。
3.2白羽肉鸡的临床表现较为严重，大群表现采食、饮水废绝，精神萎靡，部分鸡群不得不提前出栏。
3.3商品蛋雏鸡和商品蛋中鸡的症状较轻，以呼吸道为主，采食饮水变化不大，病程长达1个月左右。
4 病理变化
4.1白羽肉鸡和三黄鸡：病鸡气管充出血，内有血痰，干酪物或黄白色粘液，主要集中在气管中下段；支气管充出血，内有干酪物堵塞；部分鸡腺胃肿胀，腺胃乳头出血。
4.2商品蛋鸡青年鸡鼻腔黏膜潮红，内有脓性分泌物；气管内有分泌物。
5 病毒分离及PCR鉴定
5.1 部分病料病毒分离情况 ：所取病料经处理接种11日龄SPF鸡胚，并定时照蛋，将死亡的鸡胚收获，并检测血凝价，禽流感（H5N1、H9N2及H7亚型）及阳性血清、新城疫及阳性血清对有血凝价的尿囊液进行鉴定，H9分离结果如下：
表1 H9病毒分离情况
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调查地点
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白羽肉鸡
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蛋鸡
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三黄鸡或麻黄
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山东
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134/167
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38/59
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5/5
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广东
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--
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15/22
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广西
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--
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--
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2/2
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浙江
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--
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1/2
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1/2
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江苏
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--
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3/8
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3/3
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湖南
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---
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3/3
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湖北
|
--
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2/4
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--
|
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河南
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--
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2/6
|
--
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河北
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8
|
5/11
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天津
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5/8
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--
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--
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合计
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5.2 RT-PCR鉴定： 从来自山东、广东、辽宁等地疑似H9的尿囊液中提取RNA并反转录为DNA作为模板,进行聚合酶链式反应（RT-PCR）。按照常规方法进行PCR , 反应参数为94 ℃预变性5min ,然后进入94 ℃变性30 s ,55 ℃退火30 s 和72℃延伸2 min 的29个循环，4 ℃保存。反应结束后取5μL PCR 产物,用10 g/ L 的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。
选取来自山东、广东、辽宁等地的近十株分离毒，进行基因序列分析。我们发现，近期分离到的H9亚型禽流感存在HA核酸序列变异现象，目前流行的H9亚型毒株与青岛易邦公司的疫苗毒株H9V-YBF003的同源率可达98%以上，并且该基因序列与易邦公司研发的禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H9）中的H9保护性抗原的基因序列同源性高。
6 治疗方案的探讨
一般发病初期治疗效果较为理想；白羽肉鸡的治疗效果较差；
卡那霉素2-5万单位/只，大群饮水；
饲料中添加万分之二的氨茶碱或在饮水中加万分之五的氯化铵；
安乃近10毫克/千克体重连用5天；
7 肉鸡“新支灵”对H9亚型禽流感的防治效果反馈
7.1 2010年12月份以来，山东、北京、辽宁几个白羽肉鸡养殖公司开始免疫肉鸡新支灵，从目前的免疫效果来看，免疫效果良好，特别是山东的几个肉鸡公司，完全控制住了H9亚型禽流感的发病和流行。
7.2 2011年1月， 广东某三黄鸡养殖公司，60日龄的鸡群发生H9亚型禽流感，死亡率达10%左右。发病后对鸡场中所有的未发病鸡群（15日龄、30日龄、45日龄共三批鸡）2羽份紧急接种，免疫后至今该场没发生H9亚型禽流感。
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